Mar 19, 2025

Public workspacePOP – Mudança do HPLC da Fase Reversa para Fase Normal

DOI
https://dx.doi.org/10.17504/protocols.io.rm7vz6m5rgx1/v1
  • Ricardo Borges1
  • 1UFRJ
Ricardo M. Borges
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DOI: https://dx.doi.org/10.17504/protocols.io.rm7vz6m5rgx1/v1
Protocol Citation: Ricardo Borges 2025. POP – Mudança do HPLC da Fase Reversa para Fase Normal. protocols.io https://dx.doi.org/10.17504/protocols.io.rm7vz6m5rgx1/v1
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Protocol status: In development
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Created: March 19, 2025
Last Modified: March 19, 2025
Protocol Integer ID: 124674
Keywords: hplc configuration from reverse phase, normal utilizando dois solventes grau hplc, hplc configuration, hplc, reverse phase, hplc da fase reversa para fase normal goal, grade solvent, isopropanol, normal phase, methanol, hplc grade
Abstract
Goal Change the HPLC configuration from reverse phase to normal phase using two HPLC-grade solvents: Methanol and Isopropanol.

Objetivo
Alterar a configuração do HPLC da fase reversa para a fase normal utilizando dois solventes grau HPLC: Metanol e Isopropanol.
Materials
Materiais Necessários
  • Solventes:
  1. Metanol (grau HPLC)
  2. Isopropanol (grau HPLC)

  • Conector metálico
  • Fits A e B
  • Equipamentos HPLC e software de controle


Troubleshooting
Preparação Inicial
Retirar a coluna:
  • Remova a coluna atual do sistema.
Substituição pelo conector metálico:
  • Instale o conector metálico no lugar da coluna.

Configuração com Metanol

  1. Inserir solvente nos fits:
  • Conecte os fits A e B a uma garrafa contendo Metanol.

2. Purga:
  • Realize o procedimento de purga por 5 minutos.
Ajuste da Bomba com Metanol
  1. Ajuste do fluxo:
  • Abra qualquer método disponível.
  • Ajuste a bomba (pump) para 50% utilizando a tabela à direita na tela do software (esse ajuste não altera o método aberto).

2. Ativação do sistema:
  • Clique em system on.
  • Aumente gradativamente o fluxo até 4 mL/min.
  • Aguarde cerca de 5 minutos para estabilização.
Repetição do Procedimento com Isopropanol
  1. Repetir passos 1 a 4-2 utilizando Isopropanol:
  • Execute novamente os passos 1 a 6, substituindo o Metanol por Isopropanol.
Configuração Final para Análise
  1. Preparar solventes para análise:
  • Coloque os solventes que serão utilizados na análise nas respectivas fases A e B.

2. Nova purga:
  • Realize novamente o procedimento de purga.

3. Retornar à coluna:
  • Remova o conector metálico e reinstale a coluna que será utilizada na análise.

4. Seleção do método:
  • Selecione o método desejado ou crie um novo método conforme os parâmetros da análise.