Mar 20, 2026
Cryopreservation of C. elegans with DMSO and Trehalose
- Oscar Carrillo1
- 1Universidad UTE
Protocol Citation: Oscar Carrillo 2026. Cryopreservation of C. elegans with DMSO and Trehalose. protocols.io https://dx.doi.org/10.17504/protocols.io.n92ldex6ov5b/v1
License: This is an open access protocol distributed under the terms of the Creative Commons Attribution License, which permits unrestricted use, distribution, and reproduction in any medium, provided the original author and source are credited
Protocol status: Working
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Created: March 05, 2026
Last Modified: March 20, 2026
Protocol Integer ID: 260183
Keywords: trehalose standard protocol for the cryopreservation, cryopreservation, other nematodes with dimethyl sulfoxide, other nematode, trehalose standard protocol
Abstract
Standard protocol for the cryopreservation of C. elegans.
Based on Cryopreservation of C. elegans and Other Nematodes with Dimethyl Sulfoxide and Trehalose - Kevin F. O’Conne
Materials
1. Buffer M9:
a. 3 gramos de Fosfato monopotásico
b. 6 gramos de Fosfato disódico
c. 5 gramos de cloruro de sodio
d. 900 mililitros de agua destilada
i. Ajustar a 1 Litro y autoclavar
e. Una vez frío añadir 1ml estéril de 1M de Sulfato de magnesio y mezclar
2. Freezing buffer TDMSO
a. Trehalosa 0.08M
b. DMSO 0.5M
i. Añadir 15.1 gramos de Trehalosa
ii. Añadir 17.7 ml de DMSO
iii. Aforar con 450 ml del Buffer M9
1. Ajustar a 500 ml
c. Preservar por máximo 6 meses alicuotando en tubos Falcon de 50 ml con papel aluminio (FOTOSENSIBLE)
3. Tubos de Falcon de 15 ml
4. Pipetas Pasteur
5. Crioviales 1.5 ml
Troubleshooting
Safety warnings
Desde la re-suspensión en TDMSO no debe pasar más allá de 15 minutos para mayor viabilidad.
Before start
Comenzar de placas NGM en estado de desnutrición (sin bacterias).
Métodos
1w 0d 1h 11m
1er lavado con 10 ml de tampón M9 estéril a temperatura ambiente y transferir a tubo Falcon de 15 ml.
3m
2do lavado con 5 ml de tampón M9 estéril a temperatura ambiente y transferir a tubo Falcon de 15 ml.
3m
Centrifugar a 2000 G por 5 minutos a temperatura ambiente.
5m
Retirar sobrenadante.
3m
3er lavado con 4 ml de Buffer TDMSO.
3m
Repetir paso 4 y 5.
15m
Resuspender en 4ml de TDMSO.
3m
Alicuotar 1 ml en 4 frascos (crioviales).
3m
Desde la re-suspensión en TDMSO no debe pasar más allá de 15 minutos para mayor viabilidad.
15m
Colocar los crioviales en una caja de poliestireno y colocar a -1 ºC por 10 a 15 minutos.
15m
Pasar los tubos a -80 ºC.
3m
Probar la viabilidad en 1 semana y tras comprobarla se recomienda dejar 2 tubos en congelador a -80 ºC y otro en nitrógeno líquido.
1w
Para descongelarlos se recomienda descongelar todo el tubo y verterlo en una placa NGM o congelarlos de costado o boca abajo para poder raspar y revivirlos parcialmente.