Apr 07, 2026
Bleaching – Synchronization C. elegans
- 1Universidad UTE
Protocol Citation: Oscar Carrillo 2026. Bleaching – Synchronization C. elegans. protocols.io https://dx.doi.org/10.17504/protocols.io.14egn511pg5d/v1
License: This is an open access protocol distributed under the terms of the Creative Commons Attribution License, which permits unrestricted use, distribution, and reproduction in any medium, provided the original author and source are credited
Protocol status: Working
We use this protocol and it's working
Created: April 01, 2026
Last Modified: April 07, 2026
Protocol Integer ID: 314351
Abstract
Standard protocol for C.elegans synchronization
Based on C. elegans Methods and Applications, Third Edition - Gal Haspel
Guidelines
1. Lavar con M9 (Importante a partir desde la recuperación utilizar M9 frío) y recuperar 5 – 7 ml de gusanos y embriones de la/s cajas Petri y colocar en tubo de 15ml para centrifugar
2. Centrifugar a 3000 rpm por 1 minuto.
3. Descartar sobrenadante sin mover el pellet de gusanos y embriones.
4. Repetir el lavado nuevamente por 2 ocasiones más
5. Descartar el sobrenadante del último lavado y colocar 6 ml de solución de bleaching_.
6. Agitar moderadamente por inversión por 4 minutos, importante revisar constantemente la disolución de los cuerpos de los gusanos adultos y no pasarse de los 4 minutos**.
7. Colocar excedente de M9 para detener el bleaching (aforar hasta los 15 ml)
8. Centrifugar a 3000 rpm por 1 minuto con 15 ml de M9.
9. Descartar sobrenadante sin mover el pellet de embriones.
10. Repetir el lavado con M9 nuevamente por 5 ocasiones más.
11. Resuspender en 1ml de M9
12. Tomar 10 ul de la suspensión y colocarla en un portaobjeto para contabilizar la cantidad de embriones, realizarlo por triplicado.
13. Dejar el tubo de costado a 20º C y agitación rotatoria a 120 rpm
14. Al día siguiente contabilizar nuevamente la cantidad de gusanos en L1 presentes en la solución.
Materials
1. H2O MiliQ
2. Cloro 10%
3. NaOH 25% (w/w)
4. Tubos de 15 ml
5. Medio M9 (Frío – 10ºC)
6. Preparar bleaching solution:
a. H2O MiliQ - 10.20ml
b. Cloro 10% - 3.60ml
c. NaOH 25% (w/w) – 1.2ml
Métodos
1d 0h 40m
Lavar con M9 (Importante utilizar M9 frío) y recuperar gusanos y embriones de la/s cajas Petri para colocarlos en tubo de 15ml para centrifugar
10m
Centrifugar a 3000 rpm por 1 minuto.
1m
Descartar sobrenadante sin mover el pellet de gusanos y embriones.
1m
Repetir el lavado nuevamente por 2 ocasiones más.
5m
Descartar el sobrenadante del último lavado y colocar 6 ml de solución de bleaching_.
1m
Agitar moderadamente por inversión por 4 minutos, importante revisar constantemente la disolución de los cuerpos de los gusanos adultos y no pasarse de los 4 minutos.
4m
Colocar excedente de M9 para detener el bleaching (aforar hasta los 15 ml).
1m
Centrifugar a 3000 rpm por 1 minuto con 15 ml de M9.
1m
Descartar sobrenadante sin mover el pellet de embriones.
1m
Repetir el lavado con M9 nuevamente por 5 ocasiones más.
12m
Resuspender en 1ml de M9.
1m
Tomar 10 ul de la suspensión y colocarla en un portaobjeto para contabilizar la cantidad de embriones, realizarlo por triplicado.
1m
Dejar el tubo de costado a 20º C y agitación rotatoria a 120 rpm.
1d
Al día siguiente contabilizar nuevamente la cantidad de gusanos en L1 presentes en la solución.
1m